• Document: В.В. Оберемок Методические рекомендации к применению ПЦР-метода
  • Size: 995.87 KB
  • Uploaded: 2019-04-16 14:56:52
  • Status: Successfully converted


Some snippets from your converted document:

Министерство образования и науки Украины Таврический национальный университет им. В.И. Вернадского кафедра экологии и рационального природопользования В.В. Оберемок Методические рекомендации к применению ПЦР-метода для студентов 5 курса дневной формы обучения специальности 8. 070402 «биология» образовательно-квалификационного уровня «магистр» профессионального направления подготовки 0704 «биология» и для студентов 3 курса дневной формы обучения специальности 6.070300 «биохимия» образовательно-квалификационного уровня «бакалавр» профессионального направления подготовки 0703 «химия» Симферополь 2008 Рекомендовано к печати научно-методическим советом ТНУ от 02.11.2006 протокол № 2 2 СОДЕРЖАНИЕ Теоретическая часть (лекции) Лекция 1. Смысл полимеразной цепной реакции (ПЦР).........4 Лекция 2. Оборудование для ПЦР-метода................................7 Лекция 3. Организация ПЦР-лаборатории и правила поведения в ней….........................................................9 Лекция 4. Типичные ошибки при использовании ПЦР-метода................................................................................11 Лекция 5. Применение ПЦР-метода для разных видов научно-исследовательской работы..........................................12 Лекция 6. Подбор праймеров………………………………...15 Лекция 7. «Золотая середина» концентраций веществ в ПЦР-смеси…………………………………………...…...……16 Практическая часть (лабораторные занятия) Занятие 1. Выделение ДНК .....................................................18 Занятие 2. Амплификация ДНК...............................................21 Занятие 3. Детекция продуктов амплификации ДНК (электрофорез)........................................24 Задачи и вопросы.......................................................................27 Краткий словарь терминов и дополнительные сведения........................................................29 Список рекомендуемой и цитируемой литературы………...34 Список рекомендуемых веб-сайтов…………………….……34 3 Лекция 1. Смысл полимеразной цепной реакции (ПЦР) ПЦР – полимеразная цепная реакция, в ходе которой амплифицируются определенные участки ДНК. ПЦР была изобретена американским ученым Кэри Мюллисом в 1983 году. Широкие возможности, сравнительная дешевизна и простота ПЦР позволили использовать этот метод генетического анализа в разных областях научных исследований. В основе ПЦР лежит естественный для клеток процесс репликации (рис. 1). Отличие ПЦР от репликации состоит в том, что ПЦР происходит in vitro и воспроизводит репликацию частично. 1- геликаза 2- топоизомераза 3- ДНК-полимераза 4- ДНК-полимераза 5- лигаза 6- фрагмент Оказаки 7- дезоксинуклеозидтрифосфаты 8- затравка (праймер) Рис. 1. Репликация ДНК Основные компоненты реакции: dNTP (дезоксинуклеозидтрифосфаты), Taq-полимераза, праймеры, Mg2+, ПЦР-буфер, деионизованная вод

Recently converted files (publicly available):